실시간 핵산 서열 기반 메이저 토토 사이트 (NASBA)에 의한 피시신 노다 바이러스의 검출

인용

Starkey W, Millar RM, Jenkins ME, Ireland J, Muir K & Richards R (2004) 실시간 핵산 서열 기반 메이저 토토 사이트 (NASBA)에 의한 피스 신 Nodavirus의 탐지.수생 유기체의 질병, 59 (2), pp. 93-100. https://doi.org/10.3354/dao059093

Abstract
핵산 서열 기반 메이저 토토 사이트 (NASBA)은 표적-특이 적 프라이머 및 프로브에 기초한 등온 핵산 메이저 토토 사이트 절차 및 3 개의 효소의 조정 된 활성 : AMV 역전사 효소, RNASE H 및 T7 RNA 중합 효소이다. 우리는 해양 물고기의 주요 병원체로 등장한 피시신 노다 바이러스의 탐지를위한 실시간 NASBA 절차를 개발했습니다. 바이러스 RNA를 구아니딘 티오 시아 네이트 용해에 의해 분리 한 후 실리카 입자에서 정제 하였다. 프라이머는 노다 바이러스 캡시드 단백질 유전자에서 서열을 표적화하도록 설계되어 120 뉴클레오티드의 메이저 토토 사이트 생성물을 생성 하였다. 메이저 토토 사이트 생성물은 표적 앰플 리콘의 내부 영역을 인식하는 분자 표지 (FAM 표지/메틸-레드 켄 칭)로 실시간으로 검출되었다. Corbett Research Rotorgene에서 41 ℃에서 90 분 동안 메이저 토토 사이트 및 검출을 수행 하였다. 세포 배양 유래 노다 바이러스 및 합성 RNA 표적의 검출에 기초하여, 실시간 NASBA 절차는 단일 튜브 RT-PCR보다 대략 100 배 더 민감했다. 37 개의 임상 샘플 패널 (음성, n = 18; 양성, n = 19)의 패널을 테스트하는 데 사용될 때, 실시간 NASBA 분석은 18 개의 음성 및 19 개의 양성 샘플을 모두 올바르게 식별 하였다. 이에 비해 RT-PCR 절차는 18 개의 음성 샘플을 모두 확인했지만 16 개의 양성 샘플 만 확인 하였다. 이 결과는 실시간 NASBA가 피시신 노다 바이러스에 대한 민감하고 구체적인 진단 절차를 나타낼 수 있음을 시사합니다.

키워드
Nodavirus; 나스바; RT-PCR; 진단; 핵산 메이저 토토 사이트

저널
수생 유기체의 질병 : 59 권, 문제 2